本发明属于食品检测方法技术领域,尤其涉及一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法,步骤如下:称取样品,添加醋酸乙腈溶液,振荡提取后,进行离心,将离心后得到的乙腈提取液装入有混合填料的离心管中,振荡离心,吸取净化液,氮吹浓缩,定容后UPLC/MS/MS检测。本发明首次将此方法应用到动物源性食品检测中,针对动物产品中磺胺类、喹诺酮类、β激动剂类等107种兽药能够快速的进行定性、定量,检出限完全能够满足检测需求,检测效率大大提升。
1.一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法,其特征在于包括以下步骤:(1)提取:称取样品添加到含有醋酸乙腈溶液的离心管中,充分涡旋混匀,超声提取后,进行离心;(2)净化:将步骤(1)离心后得到的乙腈提取液装入有混合填料的离心管中,振荡离心后分别移取上清液至I、II试管中,氮吹浓缩,分别定容待检测;(3)UPLC/MS/MS检测:a、试管I在此色谱条件下,用于检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、琥珀氯霉素,仪器条件:液相条件:A:水,B:甲醇离子源:ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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b、试管II在此色谱条件下用于检测阿维菌素、伊维菌素、莫西菌素、依普菌素、盐霉素、莫能菌素、拉沙罗菌素,试管I在此色谱条件下用于检测剩余的96种兽药,此96种兽药为氨基比林、氯丙嗪、环丙沙星、氯羟吡啶、氯舒隆、达氟沙星、地塞米松、敌菌净、二氟沙星、恩诺沙星、红霉素、乙氧酰胺苯甲酯、仲丁威、氟甲喹、氟尼辛、氢化可的松、交沙霉素、吉他霉素、左旋咪唑、林可霉素、洛美沙星、马波沙星、萘啶酸、诺氟沙星、氧氟沙星、竹桃霉素、奥比沙星、奥美普林、恶喹酸、培氟沙星、安替比林、吡喹酮、醋酸泼尼松、乙胺嘧啶、利福昔明、沙拉沙星、苯甲酰磺胺、乙酰磺胺、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、新诺明、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺喹垩啉、磺胺噻唑、磺胺二甲异噁唑、泰妙菌素、替米考星、群勃龙醋酸酯、甲氧苄氨嘧啶、曲吡那敏、泰乐菌素、阿苯达唑、克林霉素、地克珠利、芬苯达唑、氟苯达唑、甲苯哒唑、甲硝哒唑、尼卡巴嗪、奥芬哒唑、洛硝哒唑、三氯苯哒唑、班布特罗盐酸盐、溴布特罗、塞布特罗、盐酸克伦特罗、盐酸克伦潘特、克伦丙罗、氯丙那林、盐酸多巴胺、非诺特罗、马布特罗、马喷特罗、喷布洛尔、苯乙醇胺A、普萘洛尔、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林、妥布特罗、盐酸齐帕特罗、金刚烷胺、罗红霉素、阿奇霉素、替硝唑、磺胺多辛、托拉菌素、头孢氨苄、磺胺氯吡嗪,仪器条件:液相条件:A:0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵,B:甲醇离子源:ESI+、ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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质谱条件:多反应监测-MRM扫描模式;步骤(2)中所述的混合填料组成为:10g无水硫酸钠、500mgxa0C₁₈和200mgxa0PSA。
2.根据权利要求1所述的一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法,其特征在于步骤(1)中所述的提取是称取均匀制样的样品3.0g于50mL离心管中,加入15mL、1%醋酸乙腈溶液,剧烈振荡1min,超声提取20min后,4000r/min离心5min。
3.根据权利要求1所述的一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法,其特征在于步骤(2)中所述的净化是转移步骤(1)离心后得到的全部乙腈提取液到装有混合填料的离心管中,涡旋混匀1min,4000r/min离心5min后,分别准确移取5.0mL上清液至10mL具塞刻度试管I、II,于45°C水浴下氮吹浓缩,试管I中加入体积比为2∶3的0.1%甲酸乙腈和水的混合液0.5mL定容,试管II中加入0.5mL乙腈定容,超声30s,涡旋混匀,过
0.22μmxa0PTFE滤膜,待UPLC/MS/MS检测。技术领域
本发明属于食品检测方法技术领域,尤其涉及一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法。
背景技术
2003年,Anastassiades和Lehotay开发了一种快速(quick)、简单(easy)、便宜(cheap)、高效(effective)、耐用(rugged)和安全(safe)的农产品中农药多残留样品前处理方法,并用首字母缩写将此种方法命名为QuEChERS。QuEChERS自发布以来,因其简化了以前繁杂的萃取步骤并扩大了所萃取农残的范围,被包括美国官定分析化学家协会AOAC在内的多个国际农药残留分析机构广泛采纳,并在农药残留领域获得了大量的应用。在兽药残留领域,由于样品基质的不同、兽药和农药的化学性质不同等因素,QuEChERS在兽药残留领域的应用还很有限。兽药残留是当前食品安全的重要问题,目前有100多种兽药在使用,大量的动物源性食品需要做兽药残留分析,检验任务既繁重又时间紧迫。我们国家的标准相对比较全面,但每个标准针对的检测项目比较单一,例如GB/T20759-2006《畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、GB/T20366-2006《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、GB/T20756-2006《可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法》等,因此建立快速、有效、灵敏、可靠且实用的兽药残留分析方法对于食品安全具有重要的现实意义。
发明内容
本发明针对上述现有技术中存在的不足,提供一种利用基质分散固相萃取技术对样品进行预处理、检测快速高效且结果准确的动物源性食品中兽药多残留的测定方法。本发明解决上述技术问题的技术方案如下:一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法,包括以下步骤:(1)提取:称取样品添加到含有醋酸乙腈溶液的离心管中,充分涡旋混匀,超声提取后,进行离心;(2)净化:将步骤(1)离心后得到的乙腈提取液装入有混合填料的离心管中,振荡离心后分别移取上清液至I、II试管中,氮吹浓缩,分别定容待检测;(3)UPLC/MS/MS检测:a、试管I在此色谱条件下,用于检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、琥珀氯霉素,仪器条件:液相条件:A:水,B:甲醇离子源:ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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b、试管II在此色谱条件下用于检测阿维菌素、伊维菌素、莫西菌素、依普菌素、盐霉素、莫能菌素、拉沙罗菌素,试管I在此色谱条件下用于检测剩余的96项兽药,仪器条件:液相条件:A:0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵,B:甲醇离子源:ESI+、ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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质谱条件:多反应监测-MRM扫描模式。进一步,步骤(1)中所述的提取是称取均匀制样的样品3.0g于50mL离心管中,加入15mL、1%醋酸乙腈溶液,剧烈振荡1min,超声提取20min后,4000r/min离心5min。步骤(2)中所述的净化是转移步骤(1)离心后得到的全部乙腈提取液到装有混合填料的离心管中,涡旋混匀1min,4000r/min离心5min后,分别准确移取5.0mL上清液至10mL具塞刻度试管I、II,于45°C水浴下氮吹浓缩至近干,试管I中加入体积比为2:3的0.1%甲酸乙腈和水的混合液0.5mL定容,试管II中加入0.5mL乙腈定容,超声30s,涡旋混匀,过0.22μmxa0PTFE滤膜,待UPLC/MS/MS检测。本发明的有益效果是:本发明采用的基质分散固相萃取技术是一种样品预处理技术,其基本操作是将固态或液态样品直接与固相萃取材料一起混合研磨,使样品均匀分散于固定相颗粒的表面,形成一个独特的色谱固定相。它浓缩了传统样品均化、组织细胞裂解、提取、过滤、净化等过程,使样品的预处理变得简便,同时也避免了目标物的损失。该方法操作简便、快捷、溶剂用量少,本发明首次将此方法应用到动物源性食品检测中,针对动物产品中磺胺类、喹诺酮类、β激动剂类等107种兽药能够快速的进行定性、定量,检出限完全能够满足检测需求,检测效率大大提升。固相萃取填料采用混合填料,即C₁₈、PSA、无水硫酸钠按一定的比例进行混合,来完成对样品的净化。对净化过程而言,使用混合固相萃取填料能够有效去除组分中的脂肪酸、糖、脂肪等干扰杂质,再用无水硫酸钠去除水分及水溶性杂质,得到的浸提液可用带有高灵敏度MS/MS检测器的UPLC进行兽药多残留分析。本发明使用的混合填料组成为:10g无水硫酸钠、500mgC₁₈和200mgPSA。
附图说明
图1为部分兽药残留的质谱图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。配制107种兽药混合标准品溶液,向阴性猪精瘦肉、鸡肉、马哈鱼和猪五花肉中分别添加氯霉素0.1μg/kg,分别添加氟苯尼考、琥珀氯霉素、甲砜霉素各1μg/kg,分别添加甲硝哒唑、洛硝哒唑各1μg/kg,分别添加盐酸克伦特罗、苯乙醇胺A各0.05μg/kg,其他β-激动剂类各添加0.5μg/kg,除上述以外其他项目各添加10μg/kg,添加水平均等于或小于我国的限量标准,每个含量水平重复4次。实施例1取上述猪精瘦肉,检测其兽药残留含量,步骤如下:(1)提取:称取均匀制样的样品3.0g于50mL离心管中,加入15mL、1%醋酸乙腈溶液,剧烈振荡1min,超声提取20min后,4000r/min离心5min;(2)净化:转移步骤(1)离心后得到的全部乙腈提取液到装有混合填料(10g无水硫酸钠、500mgC₁₈和200mgPSA)的离心管中,涡旋混匀1min,4000r/min离心5min后,分别准确移取5.0mL上清液至10mL具塞刻度试管I、II,于45°C水浴下氮吹浓缩至近干,试管I中加入体积比为2:3的0.1%甲酸乙腈和水的混合液0.5mL定容,试管II中加入0.5mL乙腈定容,超声30s,涡旋混匀,过0.22μmxa0PTFE滤膜,待UPLC/MS/MS检测;(3)UPLC/MS/MS检测:a、试管I在此色谱条件下,用于检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、琥珀氯霉素,仪器条件:液相条件:A:水,B:甲醇离子源:ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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b、试管II在此色谱条件下用于检测阿维菌素、伊维菌素、莫西菌素、依普菌素、盐霉素、莫能菌素、拉沙罗菌素,试管I在此色谱条件下用于检测剩余的96种兽药,仪器条件:液相条件:A:0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵,B:甲醇离子源:ESI+、ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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质谱条件:多反应监测-MRM扫描模式。所得到的猪精瘦肉中的兽药残留含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。实施例2取上述鸡肉,检测其兽药残留含量,步骤如下:(1)提取:称取均匀制样的样品3.0g于50mL离心管中,加入15mL、1%醋酸乙腈溶液,剧烈振荡1min,超声提取20min后,4000r/min离心5min;(2)净化:转移步骤(1)离心后得到的全部乙腈提取液到装有混合填料(10g无水硫酸钠、500mgC₁₈和200mgPSA)的离心管中,涡旋混匀1min,4000r/min离心5min后,分别准确移取5.0mL上清液至10mL具塞刻度试管I、II,于45°C水浴下氮吹浓缩至近干,试管I中加入体积比为2:3的0.1%甲酸乙腈和水的混合液0.5mL定容,试管II中加入0.5mL乙腈定容,超声30s,涡旋混匀,过0.22μmxa0PTFE滤膜,待UPLC/MS/MS检测;(3)UPLC/MS/MS检测:a、试管I在此色谱条件下,用于检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、琥珀氯霉素,仪器条件:液相条件:A:水,B:甲醇离子源:ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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b、试管II在此色谱条件下用于检测阿维菌素、伊维菌素、莫西菌素、依普菌素、盐霉素、莫能菌素、拉沙罗菌素,试管I在此色谱条件下用于检测剩余的96种兽药,仪器条件:液相条件:A:0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵,B:甲醇离子源:ESI+、ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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质谱条件:多反应监测-MRM扫描模式。所得到的鸡肉中的兽药残留含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。实施例3取上述马哈鱼,检测其兽药残留含量,步骤如下:(1)提取:称取均匀制样的样品3.0g于50mL离心管中,加入15mL、1%醋酸乙腈溶液,剧烈振荡1min,超声提取20min后,4000r/min离心5min;(2)净化:转移步骤(1)离心后得到的全部乙腈提取液到装有混合填料(10g无水硫酸钠、500mgC₁₈和200mgPSA)的离心管中,涡旋混匀1min,4000r/min离心5min后,分别准确移取5.0mL上清液至10mL具塞刻度试管I、II,于45°C水浴下氮吹浓缩至近干,试管I中加入体积比为2:3的0.1%甲酸乙腈和水的混合液0.5mL定容,试管II中加入0.5mL乙腈定容,超声30s,涡旋混匀,过0.22μmxa0PTFE滤膜,待UPLC/MS/MS检测;(3)UPLC/MS/MS检测:a、试管I在此色谱条件下,用于检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、琥珀氯霉素,仪器条件:液相条件:A:水,B:甲醇离子源:ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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b、试管II在此色谱条件下用于检测阿维菌素、伊维菌素、莫西菌素、依普菌素、盐霉素、莫能菌素、拉沙罗菌素,试管I在此色谱条件下用于检测剩余的96种兽药,仪器条件:液相条件:A:0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵,B:甲醇离子源:ESI+、ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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质谱条件:多反应监测—MRM扫描模式。所得到的马哈鱼中的兽药残留含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。实施例4取上述猪五花肉,检测其兽药残留含量,步骤如下:(1)提取:称取均匀制样的样品3.0g于50mL离心管中,加入15mL、1%醋酸乙腈溶液,剧烈振荡1min,超声提取20min后,4000r/min离心5min;(2)净化:转移步骤(1)离心后得到的全部乙腈提取液到装有混合填料(10g无水硫酸钠、500mgC₁₈和200mgPSA)的离心管中,涡旋混匀1min,4000r/min离心5min后,分别准确移取5.0mL上清液至10mL具塞刻度试管I、II,于45°C水浴下氮吹浓缩至近干,试管I中加入体积比为2:3的0.1%甲酸乙腈和水的混合液0.5mL定容,试管II中加入0.5mL乙腈定容,超声30s,涡旋混匀,过0.22μmxa0PTFE滤膜,待UPLC/MS/MS检测;(3)UPLC/MS/MS检测:a、试管I在此色谱条件下,用于检测氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、琥珀氯霉素,仪器条件:液相条件:A:水,B:甲醇离子源:ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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b、试管II在此色谱条件下用于检测阿维菌素、伊维菌素、莫西菌素、依普菌素、盐霉素、莫能菌素、拉沙罗菌素,试管I在此色谱条件下用于检测剩余的96种兽药,仪器条件:液相条件:A:0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵,B:甲醇离子源:ESI+、ESI-色谱柱:ACQUITYxa0UPLC^TMxa0HSSxa0T3xa02.1×100mm×1.8μmxa0Column色谱条件:Time-min
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质谱条件:多反应监测-MRM扫描模式。所得到的猪五花肉中的兽药残留含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。表1ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="470"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="473"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="471"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>由表1中数据可以看出,各动物源性食品中兽药残留的平均回收率均在40~140%,相对标准偏差RSD均不大于20%,回收率及相对标准偏差均符合兽药残留检测标准。以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。